近日,质量安全所全程控制技术创新团队在国际期刊《Analytical Biochemistry》上在线发表了题为“Establishment of monoclonal antibody and scFv immuno-based assay for Cry2Aa toxin in spiked grain samples”的文章。本所博士研究生沈成和郝佳博士为论文的共同第一作者,刘贤金研究员和刘媛研究员为本文的通讯作者,南非纳塔尔夸祖鲁大学的Johnson Lin教授参与了本项研究。
Cry2Aa毒素是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)在产孢过程中形成的杀虫晶体蛋白。该毒素从苏云金芽孢杆菌的kurstaki变种 (HD-1)的孢子结晶中分离出来,对鳞翅目和双翅目昆虫具有高度毒性。由于其广泛的杀虫活性,目前已有两种以上含有Cry2Aa毒素的抗虫转基因作物被开发,因此建立高灵敏度的Cry2Aa毒素检测体系是十分必要的。本研究基于Cry2Aa毒素的单克隆抗体 (mAbs) 和单链抗体 (scFv) 建立了三种不同的检测体系(IC-ELISA、DAS-ELISA和CLEIA),用来检测转基因样品中Cry2Aa毒素的含量。当单克隆抗体作为检测抗体时,对于IC-ELISA方法的IC20 ~ IC80范围为1.11 ~ 60.70 μg/mL,IC50为10.65 μg/mL。对于DAS-ELISA方法的检出限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分别为10.76和20.70 ng/mL。CLEIA的LOD和LOQ分别为6.17 ng/mL和7.40 ng/mL。当单链抗体为检测抗体时,DAS-ELISA方法的LOD和LOQ分别为118.75 ng/mL和633.48 ng/mL。CLEIA方法的LOD和LOQ分别为37.47 ng/mL和70.23 ng/mL。这些检测方法的建立,为开展Cry2Aa毒素风险监测及评估工作奠定了基础。
本研究受多项国家自然科学基金(31630061, 31972292, 31972349)项目的支持。